Yeast transgenic kit: Expression of a protein of fluorescence

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Demonstrative PW through bioluminiscence Achievable without centrifuge
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Data sheet Yeast transgenic kit: Expression of a protein of fluorescence

Description

This kit provides a new protocol that is very simplified, allowing to perform a transfer of interspecies gene. By transgenesis, the gene encoding the fluorescent protein derived from the jellyfish bioluminescent tissues will be expressed by the yeast S. cerevisiae . A very simple transformation protocol suitable for school! Jeulin designed a protocol that does not require making the cells competent. Just resuspend fresh yeast cells from a colony, mix with the transformation solution, the plasmid DNA, wave (vortex) and incubate for 30 min at 42°C. The yeasts are then cultured to verify the efficiency of the transfer, and then the revelation of the bioluminescence gene expression is performed by illuminating the boxes with UV radiation.

Content

Composition pour 15 postes :
Souche de levures sur boîte (x1)
Solution de transformation
ADN plasmidique
1 milieu prêt à couler YPD
1 milieu sélectif prêt à couler
30 Boîtes de Pétri de 55 mm,
Ensemenceur
Theme Genetics
Type of product Kits SVT
Avant le TP (2-3 jours avant) : Repiquage de la souche de levure S. cerevisiae URA
- Repiquer une colonie sur un milieu frais en suivant la technique d'ensemencement par épuisement (détaillée par la suite) afin d'obtenir des colonies fraiches distinctes pour le TP (au moins 15).

Avant le TP ou le jour du TP : Préparer les boîtes de pétri pour les ensemencements des levures transformées
- Liquéfier les milieux YPD et URA- fournis en les mettant au micro-onde puiis vérifier toutes les 15-20s l'avancement de la liquéfaction, agiter manuellement pour homogénéiser.
- Couler le milieu dans les boîtes de pétri 55mm stériles fournies (15 de chaque milieu).
- Laisser le milieu se solidifier à température ambiante durant une vingtaine de minutes.
- Retourner les boîtes de pétri.
Conserver les boîtes de pétri à 37°C ou à température ambiante.

Jour du TP :
1. Prélever une colonie de 3-4mm de diamètre à l'aide d'un bâtonnet stérile (fournis dans le tube à bouchon rouge).
2. Transférer cette colonie dans un microtube stérile (fourni) contenant 125µl de solution de transformation (fourni dans le tube à bouchon rouge).
3. Homogénéiser par refoulements à l'aide d'une micropipette.
4. Ajouter 5µl de la solution fournie (tube à bouchon bleu).
5. Ajouter également 5µl de la solution DNA « Carrier », solution facilitant la transformation (fournie dans le tube à bouchon translucide).
Vous pouvez également réaliser cette étape à 37°C ou à 30°C durant 30 min ou 1 nuit à température ambiante ; les transformants seront présents mais en moins grande quantité.
8. Après l'incubation, transférer la moitié de la solution contenant les levures transformées sur une boîte de pétri contenant le milieu sélectif (URA-) préalablement préparées et l'autre moitié de la solution sur une boîte de pétri contenant le milieu YPD, qui servira de témoin.
9. Incuber les boîtes de pétri à 30°C jusqu'à l'observation des transformants (2-3 jours)
10. Visualiser l'efficacité de la transformation sous une lampe UV permettant l'observation de la fluorescence de la protéine GFP.
Conçu à partir de composants spécifiquement non pathogènes, ce kit permet de produire des micro-organismes génétiquement modifiés dont le risque pour la santé humaine et pour l'environnement est nul.

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